Laboratorio
di Microbiologia Generale
a cura di Gabriele Giliberti
Laboratorio di Microbiologia generale è una proposta di esercitazioni
di laboratorio di Microbiologia
rivolta a studenti e docenti universitari con lo scopo di dare spunti per lo
studio e la realizzazione di percorsi didattici; nasce dall’esperienza maturata
dall’autore alla Sezione di Microbiologia e Virologia dell’Università di
Cagliari e al Consorzio Uno di Oristano. Le esercitazioni proposte prevedono
l’utilizzo di un laboratorio di Microbiologia attrezzato con una strumentazione
di base, comprendente cappe di sicurezza biologica, e prevedono l’utilizzo di camice,
guanti e mascherine come dispositivi di protezione individuale (DPI), per la
protezione delle mani da rischi fisici, chimici e biologici e per la protezione
da aerosol. Oltre ad Escherichia coli,
considerato un organismo modello in microbiologia che non presenta rischi di
patogenicità, almeno per quanto riguarda i ceppi utilizzati in laboratorio, e Bacillus subtilis, un batterio del suolo
non patogeno per l’uomo, viene proposto a scopo didattico anche l’utilizzo di
alcuni microrganismi di livello 2 di rischio biologico, quali Staphylococcus
aureus, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Shigella flexneri e Klebsiella
pneumoniae. Tali batteri possono presentare un rischio infettivo
specialmente come patogeni opportunisti in soggetti immunodepressi. L’apertura
delle colture liquide o delle piastre contenenti tali microrganismi e altre operazioni
quali agitazione o miscelazione possono generare aerosol pericolosi e devono
pertanto essere sempre effettuate sotto una cappa di sicurezza biologica a
flusso laminare verticale, di classe II.
1.
Preparazione di un terreno di coltura
2.
Isolamento di colonie singole
3.
Titolazione per conta vitale
4.
Titolazione per conta totale
5.
Piastre da contatto
6
Osservazione al microscopio ottico
7.
Osservazione con goccia pendente
8.
Colorazione semplice
9.
Colorazione negativa
10.
Colorazione di Gram
11.
Test del KOH
12.
Isolamento di microrganismi dallo yogurt
13.
Curva di crescita batterica
14.
Test della catalasi
15.
Test dell’ossidasi
16.
Terreno selettivo EMB
17.
Terreno selettivo Mannital Salt
18.
Test di fermentazione
19.
Test di idrolisi dell’amido
20.
Test del citrato
21.
Test della gelatinasi
22.
Identificazione con Api20E
23.
Tecnica dell’antibiogramma
24.
Trasformazione batterica
25.
Test di riduzione del blu di metilene