Laboratorio di Microbiologia Generale

a cura di Gabriele Giliberti

 

Laboratorio di Microbiologia generale è una proposta di esercitazioni di laboratorio di Microbiologia rivolta a studenti e docenti universitari con lo scopo di dare spunti per lo studio e la realizzazione di percorsi didattici; nasce dall’esperienza maturata dall’autore alla Sezione di Microbiologia e Virologia dell’Università di Cagliari e al Consorzio Uno di Oristano. Le esercitazioni proposte prevedono l’utilizzo di un laboratorio di Microbiologia attrezzato con una strumentazione di base, comprendente cappe di sicurezza biologica, e prevedono l’utilizzo di camice, guanti e mascherine come dispositivi di protezione individuale (DPI), per la protezione delle mani da rischi fisici, chimici e biologici e per la protezione da aerosol. Oltre ad Escherichia coli, considerato un organismo modello in microbiologia che non presenta rischi di patogenicità, almeno per quanto riguarda i ceppi utilizzati in laboratorio, e Bacillus subtilis, un batterio del suolo non patogeno per l’uomo, viene proposto a scopo didattico anche l’utilizzo di alcuni microrganismi di livello 2 di rischio biologico, quali  Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Shigella flexneri e Klebsiella pneumoniae. Tali batteri possono presentare un rischio infettivo specialmente come patogeni opportunisti in soggetti immunodepressi. L’apertura delle colture liquide o delle piastre contenenti tali microrganismi e altre operazioni quali agitazione o miscelazione possono generare aerosol pericolosi e devono pertanto essere sempre effettuate sotto una cappa di sicurezza biologica a flusso laminare verticale, di classe II.

 

1. Preparazione di un terreno di coltura

 

2. Isolamento di colonie singole

 

3. Titolazione per conta vitale

 

4. Titolazione per conta totale

 

5. Piastre da contatto

 

6 Osservazione al microscopio ottico

 

7. Osservazione con goccia pendente

 

8. Colorazione semplice

 

9. Colorazione negativa

 

10. Colorazione di Gram

 

11. Test del KOH

 

12. Isolamento di microrganismi dallo yogurt

 

13. Curva di crescita batterica

 

14. Test della catalasi

 

15. Test dell’ossidasi

 

16. Terreno selettivo EMB

 

17. Terreno selettivo Mannital Salt

 

18. Test di fermentazione

 

19. Test di idrolisi dell’amido

 

20. Test del citrato

 

21. Test della gelatinasi

 

22. Identificazione con Api20E

 

23. Tecnica dell’antibiogramma

 

24. Trasformazione batterica

 

25. Test di riduzione del blu di metilene