Laboratorio di Microbiologia Generale

a cura di Gabriele Giliberti

Terreno selettivo Mannital Salt

Con il termine di terreni selettivi si indicano quei terreni di coltura che, per la loro particolare composizione, favoriscono la crescita di particolari microrganismi o ne inibiscono quella di potenziali competitori. Il terreno Mannitol Salt agar è utilizzato per l’isolamento selettivo degli stafilococchi (Gram-positivi) da campioni clinici e non. Il terreno è selettivo per la presenza di una elevata concentrazione di sodio cloruro (7.5%) che inibisce la crescita di tutti gli altri microrganismi. Il terreno permette inoltre di differenziare lo Staphylococcus aureus, in grado di fermentare il mannitolo, dagli altri stafilococchi non fermentanti. La produzione di acidi dovuta alla fermentazione del mannitolo provoca infatti un’acidificazione del mezzo con il conseguente viraggio dell’indicatore rosso fenolo a giallo. Per l’esercitazione si utilizza Staphylococcus aureus, potenzialmente patogeno come già discusso, per cui l’apertura della coltura liquida e l’isolamento su piastra vanno eseguiti sotto una cappa di sicurezza biologica a flusso verticale.

Protocollo sperimentale

ü Sciogliere in una bottiglia con 50 ml di acqua distillata l’opportuna quantità di polvere di terreno Mannital Salt agar.

ü Sterilizzare in autoclave, versare il terreno di coltura in tre piastre Petri e lasciarlo solidificare nelle piastre.

ü Prelevare 20µl di coltura batterica liquida ed effettuare un isolamento su ciascuna piastra.

ü Utilizzare i seguenti microrganismi: 1) Staphylococcus aureus; 2) Escherichia coli.

ü Incubare le piastre a 37°C per 12-15 ore.

ü Osservare le piastre di S. aureus dopo l’incubazione: cresce provocando il cambiamento di colore del terreno a giallo, in seguito alla fermentazione del mannitolo [Fig. 1 e 3].

ü Osservare le piastre di E. coli dopo l’incubazione: non cresce e il terreno rimane quindi rosso [Fig. 2 e 3].

Fig. 1: colonie di S. aureus cresciute su terreno selettivo Mannital Salt.

Fig. 2: cellule di E. coli seminate su terreno selettivo Mannital Salt.

Fig. 3: confronto tra cellule di S. aureus ed E. coli, seminate su terreno selettivo Mannital Salt, dopo incubazione a 37°C.